豬瘟抗體如何檢測才更準(zhǔn)確

 

豬瘟在我國屬重大動物疫病。我國對豬瘟防控主要采用豬瘟疫苗免疫的策略，而抗體檢測是免疫效果評價的主要手段。目前，世界動物衛(wèi)生組織推薦的豬瘟抗體檢測方法是ELISA 檢測方法和熒光抗體中和試驗，而熒光抗體中和試驗對試驗條件和操作人員的要求很高，且耗時長，僅適合專業(yè)實驗室進(jìn)行少量樣本檢測，不宜推廣應(yīng)用。因此可以說，ELISA方法是目前國際上承認(rèn)的惟一適合大規(guī)模應(yīng)用的豬瘟抗體檢測方法。

 

在進(jìn)行ELISA檢測方法評價時，最重要的兩個指標(biāo)就是敏感性和特異性，而二者又存在一定的矛盾性。當(dāng)對一種檢測方法的敏感性要求較高時，勢必會損失一部分特異性；同樣，當(dāng)特異性要求較高時，勢必會損失一部分敏感性。因此，對于一個好的檢測方法來說，一定要尋找敏感性和特異性最佳的平衡點和結(jié)合點。目前，用于豬瘟抗體檢測的ELISA方法主要有阻斷ELISA和間接ELISA兩種原理。阻斷ELISA使用了單克隆抗體，因此檢測的特異性更高；而間接ELISA則更側(cè)重于敏感性。

 

阻斷ELISA 和間接ELISA 在實際應(yīng)用過程中，均具有合理性。但是針對我國的大規(guī)模豬瘟強制免疫現(xiàn)狀，如何在不同的應(yīng)用范圍選擇適合的試劑盒就成為一個重要問題。 因此，本文主要介紹間接ELISA試劑盒和進(jìn)口阻斷ELISA試劑盒在臨床應(yīng)用上的對比研究，幫助讀者在實際生產(chǎn)中選擇更為合適的檢測試劑。

 

試劑盒研制原理的差異

 

阻斷試劑盒基于液相阻斷原理，反應(yīng)孔的顏色深淺與血清中的抗體含量成反比。阻斷ELISA采用了單克隆抗體檢測，可大大提高檢測的特異性，但實際檢測的對象卻只是針對單一表位的抗體（檢測為特異性抗體）。因此，當(dāng)陽性血清中針對該表位抗體豐度不高時，會導(dǎo)致檢測的敏感性降低（出現(xiàn)假陰性結(jié)果）。  

 

間接試劑盒基于間接ELISA 原理，反應(yīng)孔顏色深淺與結(jié)合在反應(yīng)板中的特異性抗體的量成正比。由于間接ELISA檢測的是針對包被抗原蛋白的多克隆抗體（檢測為豬體內(nèi)的總抗體），因此會提高檢測的敏感性。

 

兩種試劑盒與熒光抗體病毒中和試驗符合率分析

 

熒光抗體病毒中和試驗（FVNT）是OIE 推薦方法，為豬瘟抗體檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。有臨床試驗表明對兩種ELISA抗體檢測試劑盒檢測結(jié)果存在差異的283 份血清樣本采用FVNT的方法進(jìn)行了確認(rèn)檢測，結(jié)果顯示，間接試劑盒與FVNT 的符合率為69.26%，阻斷試劑盒與FVNT 的符合率為28.62%。不符合樣本的確認(rèn)結(jié)果表明，間接試劑盒能更真實地反映疫苗免疫后的中和抗體水平，而阻斷試劑盒對陽性血清存在明顯的漏檢狀況。

 

對免疫豬血清抗體的動態(tài)監(jiān)測

 

通過對免疫豬抗體增長趨勢的檢測結(jié)果看出，豬瘟抗體間接ELISA對抗體由陰轉(zhuǎn)陽的檢出時間為免疫后的12-15d，而阻斷ELISA試劑盒檢測表明在免疫后的15-28d陸續(xù)由陰性轉(zhuǎn)為陽性。由于間接ELISA 檢測的是針對E2蛋白的所有抗體，而阻斷ELISA檢測的是針對E2蛋白某一個表位的抗體，在免疫初期由于抗體豐度的不同，導(dǎo)致間接ELISA對陽性抗體的檢出要早于阻斷ELISA。說明間接ELISA敏感性更高，更適合免疫后的早期監(jiān)測，疫苗效力監(jiān)測和免疫程序的制定。

 

對不同抗體水平的豬血清進(jìn)行有效的區(qū)分

 

豬瘟抗體間接ELISA試劑盒可以對不同抗體水平的豬血清進(jìn)行有效的區(qū)分，可以從IE值上直觀的比較兩份血清抗體水平的高低。間接法試劑盒中所采用的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清為反復(fù)免疫的豬瘟抗體強陽性血清，而待檢的免疫血清在免疫后213d達(dá)到最高值時，仍不到陽性對照血清OD值的80%。因此說明，間接ELISA試劑盒能夠在更寬的范圍內(nèi)對抗體水平進(jìn)行區(qū)分。而阻斷ELISA試劑盒采用的是阻斷ELISA原理，當(dāng)抗體達(dá)到可以將包被的抗原全部封閉的水平后，就出現(xiàn)了檢測平臺期。因此，阻斷ELISA只能在一定范圍內(nèi)對抗體水平的高低進(jìn)行區(qū)分。

 

臨床應(yīng)用

 

在進(jìn)行田間大規(guī)模普查時，需要對某一地區(qū)，某一群體的整體免疫狀況進(jìn)行分析，因此對檢測方法的敏感性要求較高，間接ELISA更適合于我國豬場大規(guī)模豬瘟疫苗普免抗體水平的普查。針對種豬場豬瘟的凈化，需要對每頭動物的抗體水平進(jìn)行檢測評價的同時，還要排除其他疫病陽性抗體的干擾，因此對檢測方法的特異性要求較高，熒光抗體病毒中和試驗為金標(biāo)準(zhǔn)。在實際應(yīng)用過程中，一定要對試劑盒的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格的甄選，并且根據(jù)實際應(yīng)用對象選擇適當(dāng)?shù)臋z測方法。

 

文中數(shù)據(jù)來源：國家豬瘟參考試驗室；

稿件來源：南京天邦

摘自《動物防疫一線》2017年第6期