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[發(fā)明公布] 基因缺失的減毒非洲豬瘟病毒及其作為疫苗的應用

申請人：中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所(中國動物衛(wèi)生與流行病學中心哈爾濱分中心)

本發(fā)明涉及可作為疫苗的基因缺失減毒非 洲豬瘟病毒及疫苗以及構(gòu)建方法。本發(fā)明采用非 洲豬瘟中國流行株Pig/CN/HLJ/2018，經(jīng)基因工 程技術，將非洲豬瘟病毒的毒力基因缺失，獲得 MGF360-505R缺失和CD2V與MGF360-505R聯(lián)合缺失的基因缺失病毒。經(jīng)實驗表明所述兩種毒株均能提供對非洲豬瘟中國流行強毒株的100％免疫保護，可作為安全和有效的防控中國非洲豬瘟疫情的疫苗，具有極大的社會價值。

本發(fā)明獲得的基因缺失的減毒非洲豬瘟病毒具有下述優(yōu)勢：

本發(fā)明構(gòu)建的兩株基因缺失非洲豬瘟病毒(rASFVΔ360-eGFP和rASFVΔCD2V/360-eGFP-mCherry) 在免疫豬 后，即使105TCID50劑量免疫組動物均無體溫升高等臨床癥狀，血液和臟器病毒分離均為陰 性，存活率均為100％，表明其充分致弱，作為疫苗是非常安全的，且均優(yōu)于國外基因II型 ASFV的類似研究[Borca，M .V .，et al .，Deletion of a CD2-like gene，8-DR，from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine .J Virol， 1998 .72(4)：p .2881-9；O′Donnell，V .，et al .，African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol，2015 .89(11)：p .6048-56 .](表1)：國外采用我國流行株同源性極高的Georgia株 構(gòu)建了MGF360-505R基因缺失病毒，在免疫豬后的血液病毒分離陽性率在60％ 以上；采用 基因II型Malawi Lil-20/1株構(gòu)建的CD2V單基因缺失病毒，在免疫豬 后血液病毒分離陽性 率為100％、存活率僅為0％。其次，在有效性方面，強毒攻擊后，本發(fā)明構(gòu)建的rASFVΔ360- eGFP和rASFVΔCD2V/360-eGFP-mCherry免疫保 護率均為100％，血液病毒分離陽性率分別 小于35％和100％，但在第21-22天均 轉(zhuǎn)為陰性，表明兩株病毒都具有極佳的免疫保護效 力，也明顯優(yōu)于國外采用基因 II型ASFV的類似研究[Borca，M .V .，et al .，Deletion of a CD2-like gene，8-DR，from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine .J Virol，1998.72(4)：p.2881-9；O′Donnell，V.，et al .，African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol，2015 .89(11)：p . 6048-56 .](表1)：國外MGF360-505R缺失 Georgia株病毒免疫豬在攻毒后的血 液病毒分離陽性率為70％[O′Donnell，V .，et al .， African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol，2015 . 89(11)：p .6048-56](其中，本發(fā)明采用 的103TCID50免疫劑量小于國外的104 HAD50，但攻毒后血液病毒分離陽性率僅為25％)；雖然本發(fā)明構(gòu)建的 MGF360-505R和CD2V雙基因缺失病毒免疫豬在攻毒后血液病毒分離陽性率 為 100％，略差于MGF360-505R基因缺失的病毒，但顯著優(yōu)于CD2V單缺失的基因 II型 Malawi Lil-20/1株病毒(免疫后死亡率100％)[Borca，M .V.，et al .，Deletion of a CD2- like gene，8-DR，from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine .J Virol，1998 .72(4)：p .2881-9]，且攻毒后21天血液病毒分離就轉(zhuǎn)為陰 性。最后，本發(fā)明構(gòu)建的兩株基因缺失病毒免疫后21天就能夠提供充分的強毒攻擊保護， 優(yōu)于國外的28天[O′Donnell，V .，et al .，African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol， 2015 . 89(11)：p .6048-56]。因此，采用流行地區(qū)的分離株來構(gòu)建非洲豬瘟基因缺失減毒疫苗是最佳策略，也是中國研制非洲豬瘟疫苗的關鍵。因此，本發(fā)明構(gòu)建的基因缺非洲 豬瘟病毒(rASFVΔ360-eGFP和rASFVΔCD2V/360-eGFP-mCherry)具有 巨大的應用價值。

[0023] 注：“-”表示未攻毒(由于該毒株免疫就已經(jīng)導致豬全部死亡)。

[0024] 其中的保藏信息：本發(fā)明基于CN/HLJ/18株的MGF360-505R基因缺失的具 體病毒， 和CD2V與MGF360-505R聯(lián)合缺失的基因缺失的具體病毒已于2019年 4月11日進行專利程序保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號分別是CCTCC NO：V201925和CCTCC NO：V201924。

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